摘要：細菌在翻譯過程中,mRNA受到損傷(如缺失終止密碼子)時會使翻譯提前終止,導致核糖體熄火,細菌自身會啟動核糖體拯救途徑。由tmRNA-SmpB介導的反式翻譯系統是結核分枝桿菌中的核糖體拯救途徑,對結核分枝桿菌的生長繁殖有重大影響。為探究分枝桿菌中反式翻譯途徑的啟動及其功能特點,本研究選取恥垢分枝桿菌為實驗菌株,分別以 mCherry和egfp 作為報告基因,通過在報告基因3 ′端添加大腸埃希菌終止子序列,構建能在菌體中反映反式翻譯表達的報告體系,并初步探究該體系中報告基因的動態表達特點。結果顯示,相比正常表達mCherry的對照菌株,實驗菌株中表達的錯誤mCherry蛋白很快被水解,菌體顏色均明顯淺于前者,增強綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)定量檢測數據也顯示錯誤EGFP水平顯著低于正常表達的EGFP水平,表明兩種反式翻譯報告體系均構建成功。報告基因的動態表達數據顯示,蛋白出現翻譯異常時,恥垢分枝桿菌可在蛋白翻譯過程中快速啟動反式翻譯途徑,并于 40~ 45 h將不成熟錯誤蛋白完全水解。本研究構建的反式翻譯報告體系可為后續開展分枝桿菌反式翻譯途徑的功能研究及抗結核藥物篩選提供幫助。