白蠟蟲far3基因cDNA全長克隆、原核表達和酶活分析
作者：趙遵嶺; 王雪慶; 楊璞 中國林業科學研究院資源昆蟲研究所; 國家林業局資源昆蟲培育與利用重點實驗室; 昆明650224
摘要：脂酰輔酶A還原酶(FAR)可將脂酰輔酶A還原為相應的脂肪醇,在白蠟生物合成中起至關重要的作用。本研究通過cDNA末端快速擴增技術獲得白蠟蟲Ericerus pela far3基因cDNA全長,其開放閱讀框(ORF)1 566 bp。對白蠟蟲FAR3編碼蛋白進行系統發育分析,發現FAR3與人類Homo sapiens、小鼠Mus musculus、黑腹果蠅Drosophila melanogaster等物種的FAR聚為一支;成功構建pET-30a eGFP/EpelFAR3原核表達質粒,轉入大腸桿菌Escherichia coli BL21感受態細胞,在濃度為0.05 mmol·L^-1的異丙基硫代半乳糖苷誘導6 h后有較高的蛋白表達量;經Western blot驗證,表達蛋白分子量與預估蛋白分子量符合;質譜分析蛋白質分值為3 900,肽段覆蓋度74%,所得肽段與理論序列相符;利用底物C24脂酰輔酶A、C26脂酰輔酶A、C28脂酰輔酶A和C30脂酰輔酶A對原核表達蛋白進行活性分析,利用氣相色譜進行蛋白活性驗證,沒有理論產物相應脂肪醇的生成。本研究中白蠟蟲far3 cDNA ORF的獲得及原核表達的實現,為進一步的功能和組織表達定位研究奠定了基礎。
注：因版權方要求，不能公開全文，如需全文，請咨詢雜志社。
四川動物雜志
四川動物雜志， 雙月刊，本刊重視學術導向，堅持科學性、學術性、先進性、創新性，刊載內容涉及的欄目：研究報告、基礎資料 、野生動物保護與自然保護區 、實驗動物與動物實驗、教學探索 、經濟動物與動物養殖、綜述與講座。等。于1981年經新聞總署批準的正規刊物。
- 北大期刊
- 統計源期刊
- 1-3個月審核
