摘要：目的:基于NF-κB信號(hào)通路探討?yīng)毣罴纳鷾种浦嗵钦T導(dǎo)的軟骨細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。方法:取4周齡SPF級(jí)SD大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨,分離軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。取培養(yǎng)的第2代軟骨細(xì)胞,隨機(jī)分為5組。空白組中加入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基,模型組加入含10 ng·mL^-1 脂多糖的10%FBS DMEM培養(yǎng)基,獨(dú)活寄生湯低、中、高濃度組加入含脂多糖(10 ng·mL ^-1 )和獨(dú)活寄生湯(濃度分別為100 μg·mL^-1 、200 μg·mL^-1 、300 μg·mL ^-1 )的10%FBS DMEM培養(yǎng)基。干預(yù)8 h后,采用ELISA法測(cè)定各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9含量,確定獨(dú)活寄生湯最佳干預(yù)濃度。隨后取培養(yǎng)的第2代軟骨細(xì)胞,隨機(jī)分為4組。空白組不進(jìn)行干預(yù),模型組加入10 ng·mL ^-1 脂多糖,獨(dú)活寄生湯組加入10 ng·mL^-1 脂多糖和最佳濃度的獨(dú)活寄生湯,抑制劑組加入10 ng·mL ^-1 脂多糖和10 μmol吡咯烷二硫代甲酸銨鹽。干預(yù)8 h后,采用熒光定量PCR法檢測(cè)軟骨細(xì)胞中NF-κB基因含量、用免疫熒光檢測(cè)法觀(guān)察軟骨細(xì)胞中NF-κB蛋白核轉(zhuǎn)位情況。結(jié)果:①獨(dú)活寄生湯最佳干預(yù)濃度測(cè)定結(jié)果。空白組、模型組、獨(dú)活寄生湯低濃度組、獨(dú)活寄生湯中濃度組、獨(dú)活寄生湯高濃度組的MMP-9含量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.125±0.012)ng·mL ^-1 ,(0.154±0.008)ng·mL^-1 ,(0.148±0.012)ng·mL ^-1 ,(0.148± 0.010)ng·mL ^-1 ,(0.134±0.002)ng·mL^-1 ,χ^ 2=10.034,P =0.040]。模型組的MMP-9含量高于空白組和獨(dú)活寄生湯高濃度組( P=0.002,P =0.006);空白組與獨(dú)活寄生湯高濃度組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P =0.573);獨(dú)活寄生湯低、中濃度組MMP-9含量與模型組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P=0.483,P =0.356)。上述測(cè)定結(jié)果顯示獨(dú)活寄生湯最佳干預(yù)濃度為 300 μg·mL ^-1 。②軟骨細(xì)胞中NF-κB基因含量。空白組、模型組、獨(dú)活寄生湯組、抑制劑組的NF-κB基因含量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[1.