基于酵母雙雜交技術的PRR11相互作用蛋白篩選與初步分析
作者：余淋麗; 張蓮; 張春冬; 卜友泉 重慶醫科大學生物化學與分子生物學教研室重慶醫科大學分子醫學與腫瘤研究中心; 重慶400016
摘要：目的:采用酵母雙雜交技術,篩選PRR11的相互作用蛋白,為深入研究其分子行為機制奠定基礎。方法:構建用于酵母雙雜交篩選的PRR11誘餌質粒并檢測其自激活作用,根據結果進一步構建突變體獲得具有較低自激活作用的突變體。對人胎腦cDNA文庫進行篩選,獲得初始陽性克隆。通過LacZ報告基因檢測、回轉驗證、陽性克隆測序及BLAST序列比對分析,排除假陽性克隆和重復克隆,確定PRR11的候選相互作用蛋白。結果:PRR11具有自激活作用,構建了一個較低自激活作用的PRR11突變體。通過酵母雙雜交篩選,獲得102個初始陽性克隆轉化子。經LacZ報告基因檢測,將陽性克隆鎖定至39個。通過測序和序列比對分析,證實這39個克隆屬于編碼15種不同蛋白的基因。最終有RNF41等4個蛋白通過回轉驗證。結論:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潛在相互作用蛋白。
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