人源瞬時受體電位M2型通道Nudix水解酶9同源結構域的提取和純化
作者：葉培武; 余夏飛; 馬騁; 楊巍 浙江大學醫學院生物物理系; 浙江杭州310058; 浙江大學醫學院蛋白質平臺; 浙江杭州310058
摘要：目的:摸索人源瞬時受體電位M2型通道(TRPM2)羧基端Nudix水解酶9(NUDT9)同源結構域(NUDT9-H)的蛋白提取和純化方法。方法:異丙基硫代半乳糖苷誘導表達的Rosetta(DE3)大腸埃希菌菌株經超聲破碎和離心后,將收集到的上清液與GST磁珠結合并用還原型谷胱甘肽洗脫以抽提GST-NUDT9-H融合蛋白,濃縮離心后再經分子排阻色譜層析純化,最后經凝血酶酶切并與GST磁珠結合即得NUDT9-H蛋白。結果:含有0.5%的十二烷基-β-D-麥芽糖苷(DDM)裂解溶液體系和0.025%的DDM分子排阻層析色譜溶液體系能夠提高GST-NUDT9-H融合蛋白的穩定性,再按每2mg融合蛋白加入1U凝血酶切割24h,即獲得高純度NUDT9-H蛋白。結論:NUDT9-H蛋白穩定性較差,提取和純化體系中需添加DDM以穩定其構象從而提高目的蛋白的產量和純度。
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