抗豬流行性腹瀉病毒納米單鏈抗體CNC-CBD-scFv的制備及鑒定
作者：劉慧敏; 李浩; 朱文嬌; 常琛; 路萬平; 楊國慶 河南農業大學生命科學學院; 河南鄭州450002
摘要：為防治豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),本文制備納米化抗PEDV單鏈抗體(singlechain fragment,scFv)并驗證其生物學特性。通過PCR方法擴增含有纖維素結合結構域(cellulose binding domain,CBD)的單鏈抗體基因CBD-scFv,構建抗PEDV的原核重組表達載體pET19b-CBD-scFv,鑒定正確后進行蛋白表達與鑒定。經硫酸水解法制備納米纖維素(cellulose nanocrystal,CNC)后,將純化復性后的CBD-scFv蛋白與CNC孵育結合得到納米抗體CNC-CBD-scFv,通過SDS-PAGE和透射電鏡鑒定復合物的結合效果。SDS-PAGE與Westernblot結果表明抗體蛋白CBD-scFv正確表達;制備的納米纖維素粒度均達到納米材料級別;CNC與CBD-scFv結合后SDS-PAGE與透射電鏡結果說明CNC與CBD-scFv在室溫條件下可高效結合。本試驗在高效表達合成復合納米抗體材料的同時為PEDV的防治及應用奠定了一定的試驗基礎。
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中國獸醫學報雜志
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