摘要：為了建立基于單個(gè)B細(xì)胞制備抗體技術(shù),本研究以O(shè)型滅活FMDV為抗原,采集健康C57/BL小鼠脾細(xì)胞,經(jīng)過(guò)磁珠富集、流式B220+/CD38+/Ig G1+/抗原+分選,獲得單個(gè)抗原特異性的B細(xì)胞。經(jīng)單細(xì)胞巢式PCR反應(yīng)擴(kuò)增獲得抗體完整輕、重鏈可變區(qū)序列后,分別構(gòu)建輕/重鏈表達(dá)質(zhì)粒,然后共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞后,成功獲得3株特異性單克隆抗體,且證明均屬于Ig G1型抗體;ELISA結(jié)果顯示,獲得的3株抗體均能與O型FMDV抗原結(jié)合;免疫熒光試驗(yàn)證明,3株抗體能夠特異性結(jié)合細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的O型FMDV。本研究成功建立了基于單個(gè)B細(xì)胞直接制備抗FMDV單抗的方法,為后期開(kāi)發(fā)特異性單克隆抗體打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。