CRISPR/Cas9介導的豬IPEC-J2細胞CD13基因敲除細胞系的建立
作者：王曉朋; 徐奎; 魏迎輝; 張秀玲; 劉莎莎; 邱乙卿; 劉穎; 趙海全; 牟玉蓮; 李奎 佛山科學技術學院生命科學與工程學院廣東省動物分子設計與精準育種重點實驗室; 佛山528000; 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所; 北京100193
摘要：旨在利用CRISPR/Cas9基因組編輯技術制備CD13基因敲除的IPEC-J2(豬空腸上皮細胞系)細胞,揭示細胞表面分化抗原13(cluster of differentiation 13,CD13)在腸道病原微生物感染腸道細胞中所起的作用。本研究在豬CD13基因第2外顯子區域設計2個向導RNA(guide RNA,gRNA),命名為g3、g5,然后分別將g3和g5克隆到pX330-GFP和pX330-RFP載體骨架上,電轉染IPEC-J2細胞,48 h后通過流式細胞術分選具有雙熒光標記的細胞,培養并獲得單克隆細胞,PCR擴增、測序,從而獲得CD13基因純合敲除的陽性細胞系。對獲得的20個細胞單克隆進行PCR,并挑取部分克隆PCR產物測序,發現共有7個克隆發生了基因片段缺失,其中1個克隆為單等位基因片段缺失,3個克隆為雙等位基因雜合片段缺失,3個克隆為雙等位基因純合片段敲除。本研究檢測雙等位基因純合片段敲除細胞的蛋白表達水平,其結果顯示,在該純合敲除細胞中CD13蛋白幾乎不表達,表明成功構建了CD13敲除的IPEC-J2細胞系。本研究獲得的CD13基因敲除細胞系為探究CD13在豬腸道病原微生物感染腸道細胞中所起的作用奠定了基礎。
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畜牧獸醫學報雜志
畜牧獸醫學報雜志， 月刊，本刊重視學術導向，堅持科學性、學術性、先進性、創新性，刊載內容涉及的欄目：綜述、遺傳育種、生物技術與繁殖、營養與飼料、預防獸醫、基礎獸醫、研究簡報等。于1956年經新聞總署批準的正規刊物。
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