人IgE Fc基因的克隆、純化、真核表達載體的構建及序列測定
作者：李雪飛; 陸海濤; 劉利君; 楊寧; 馬麗娜; 吳景良; 牛艷東; 段昕所 承德醫學院附屬醫院皮膚科; 河北承德067000
摘要：目的:構建重組質粒pEGFP-N1/IgE Fc,為建立一種以IgE分子Fc段為佐劑的高效安全的抗腫瘤免疫治療奠定基礎。方法:分離急性蕁麻疹病人的外周靜脈血淋巴細胞,Trizol一步法提取總RNA,甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳證實所提RNA沒有明顯降解后,在AMV逆轉錄酶作用下進行逆轉錄反應,Pfu DNA聚合酶作用下進行聚合反應得到目的片斷。提取質粒pEGFP-N1,將pEGFP-N1及IgE Fc基因的cDNA分別用限制性內切酶EcoRⅠ、BamHⅠ雙酶切,電泳分離,純化回收試劑盒回收IgE Fc基因cDN斷和質粒pEGFPN1,T4DNA連接酶連接兩片斷,連接產物轉化感受態細胞Top10,小量提取質粒,限制性內切酶EcoRⅠ、BamHⅠ初步酶切鑒定,重組質粒送大連寶生物工程有限公司測序。結果:酶切及測序結果表明pEGFP-N1/IgE Fc真核表達質粒構建成功。結論:成功構建重組質粒p EGFP-N1/IgE Fc,為進一步研究其功能及探索新的抗腫瘤方向奠定了基礎。
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