摘要：目的:探討人巨細胞病毒(HCMV)US31蛋白及其多克隆抗體的制備及鑒定方法。方法:HCMV US31基因經(jīng)原核密碼子優(yōu)化后進行全基因合成,克隆至pET21a(+)原核表達載體,構(gòu)建pET21a(+)/HCMVUS31重組質(zhì)粒,測序鑒定;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導目的蛋白表達,Ni-NTA親和層析法純化US31蛋白,免疫新西蘭兔制備多克隆抗體,ELISA、Western blot及免疫熒光方法檢測抗體效價和特異性。結(jié)果:在大腸桿菌中誘導出高表達的HCMV US31融合蛋白,經(jīng)Ni-NTA親和純化后獲得高純度的目的蛋白;免疫新西蘭兔誘導產(chǎn)生特異性的IgG抗體,效價為1:49600;經(jīng)ELISA、Westernblot以及免疫熒光均證實制備的特異性抗體可識別細胞中表達的US31蛋白。結(jié)論:成功制備了HCMV US31蛋白及特異性抗體,為進一步研究US31蛋白的生物學功能奠定了基礎(chǔ)。