摘要：目的:研究lncRNA GABPB1-AS1調控氧化應激適應性線粒體生成的關鍵調控因子PGC-1α和GABPB1的活化的作用機理。方法:人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)以200 μM的H2O2刺激3h構建氧化應激細胞模型,去除H2O2后繼續培養,檢測GABPB1-AS1在細胞應激后階段的表達行為及其對PGC-1α和GABPB1的調控作用。1)qRT-PCR檢測GABPB1-AS1和PGC-1α在去除H2O2后2h、4h、8h和16h表達情況,western bloting(WB)檢測對應時段PGC-1α蛋白水平。轉染GABPB1-AS1的siRNA和表達質粒,WB檢測其對PGC-1α蛋白水平的影響。Tagertscan數據庫預測miR-101與GABPB1-AS1和PGC-1α的結合關系,RNA pull down檢測GABPB1-AS1對miR-101的親和吸附作用,轉染miR-101的mimic和inhibitor,WB檢測其對PGC-1α蛋白水平的影響;2)qRT-PCR檢測GABPB1-AS1和GABPB1在去除H2O2后2h、4h、8h、16和24h表達情況,WB檢測對應時段GABPB1蛋白水平及過表達GABPB1-AS1后GABPB1蛋白水平。NCBI數據庫預測并用RNA pull down和RNAprotection assay(RPA)驗證GABPB1-AS1與GABPB1序列重疊位點、親和吸附作用及其生理意義。結果:1)氧化應激誘導高表達的GABPB1-AS1在去除H2O2后逐漸降低至基線水平,對應時段PGC-1α蛋白水平顯著增高;敲低和過表達GABPB1-AS1可以分別抑制和上調PGC-1α蛋白水平;miR-101在GABPB1-AS1和PGC-1α的3’UTR上均有結合位點,RNA pull down證明GABPB1-AS1親和結合miR-101,過表達和敲除miR-101分別抑制和上調PGC-1α蛋白水平;2)氧化應激作用誘導GABPB1-AS1與GABPB1協同表達,而GABPB1蛋白變化則呈“U”曲線,過表達GABPB1-AS1下調GABPB1 mRNA及蛋白水平,GABPB1-AS1與GABPB1 mRNA的前端1~449 nt序列互補,RNA pull down和RPA實驗證實二者在1~447 nt互補結合形成重疊二聚體結構,并保持GABPB1 mRNA穩定。結論:氧化應激誘導高表達的LncRNA GABPB1-AS1在應激適應階段通過GABPB1-AS1/miR-101/PGC-1α軸,上調PGC-1α蛋白水平,促進應激適應性線粒體生成,GABPB1-AS1作為核質互作信號分子參與氧化?