miR-27a對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡影響的體外研究
摘要：目的：探討miR-27a對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制.方法：分別構(gòu)建miR-27a過表達(dá)和敲除FOXO1的SGC-7901細(xì)胞株,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況.蛋白質(zhì)印跡法（Westernblot）檢測(cè)細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同時(shí)檢測(cè)上調(diào)及下調(diào)miRNA-27a的胃癌細(xì)胞FOXO1的表達(dá)水平.雙熒光素酶報(bào)告基因分析法驗(yàn)證miR-27a的靶基因.實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RealtimePCR）檢測(cè)miR-27a高表達(dá)質(zhì)粒、miR-27a低表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率,并檢測(cè)過表達(dá)/敲低miRNA-27a的胃癌細(xì)胞中FOXO1mRNA的水平.結(jié)果：（1）上調(diào)miR-27a的細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯下降,且凋亡相關(guān)蛋白BCL-2表達(dá)上調(diào),p53水平下降,自噬相關(guān)蛋白LC3I、LC3II的表達(dá)較對(duì)照組下調(diào)（P〈0.05）.而敲低胃癌細(xì)胞中FOXO1后得到了與上調(diào)miR-27a相似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果.（2）雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證結(jié)果顯示miR-27a與FOXO1存在靶點(diǎn)關(guān)系.miR-27a高表達(dá)質(zhì)粒、miR-27a低表達(dá)質(zhì)粒分別成功轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞中.上調(diào)或下調(diào)胃癌細(xì)胞中miR-27a后,SGC-7901細(xì)胞中FOXO1mRNA水平無明顯變化（P〉0.05）,FOXO1基因表達(dá)在蛋白水平相應(yīng)下調(diào)或上調(diào).結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)中,miR-27a可通過靶向抑制FOXO1的表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞凋亡,miR-27a/FOXO1軸可以為胃癌治療提供新的策略.
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