摘要:以肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因組為模板,通過PCR擴增得到其漆酶基因lac;基于畢赤酵母密碼子偏愛性優化后,得到新型漆酶基因lacm;將其與大腸桿菌-畢赤酵母(E.coli-P.pastoris)穿梭表達載體pPIC9K連接,構建重組質粒pPIC9K-lacm;將該質粒轉化畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,實現該漆酶的胞外分泌表達,發酵液中重組漆酶(rLACM)活力達0.37U/mL.經對rLACM酶學性質分析表明:rLACM的最適溫度為70℃,最適pH為8.0,在30~70℃、pH5.0~9.0活力穩定.
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