摘要：目的:利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除人肝癌細(xì)胞HepG2中的四個(gè)半LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1(FHL1)基因,構(gòu)建FHL1基因敲除的HepG2穩(wěn)定細(xì)胞株。方法:根據(jù)CRISPR/Cas9靶點(diǎn)設(shè)計(jì)規(guī)則,設(shè)計(jì)特異性識(shí)別FHL1基因第三外顯子相關(guān)序列的上下游小向?qū)NA,構(gòu)建真核重組表達(dá)質(zhì)粒,測(cè)序鑒定后,將重組質(zhì)粒包裝慢病毒感染HepG2細(xì)胞,用嘌呤霉素抗性篩選穩(wěn)定敲除FHL1基因的細(xì)胞株,用免疫印跡法鑒定HepG2細(xì)胞中FHL1基因的敲除效果,利用生長(zhǎng)曲線(xiàn)實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)基因敲除對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移的影響。結(jié)果:篩選出敲除FHL1基因的HepG2細(xì)胞株,且FHL1基因敲除顯著促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移。結(jié)論:利用CRISPR/Cas9技術(shù)獲得了內(nèi)源FHL1基因敲除細(xì)胞株,初步實(shí)驗(yàn)提示敲除FHL1基因可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和遷移,為后續(xù)研究FHL1在肝癌中的功能奠定了基礎(chǔ)。