小桐子低溫脅迫下microRNA實時熒光定量PCR內參的篩選與比較
作者：孔春艷; 陳永坤; 王莎莎; 郝大海; 楊宇; 龔明 云南師范大學生命科學學院; 生物能源持續開發利用教育部工程研究中心; 云南省生物質能與環境生物技術重點實驗室; 昆明650500
摘要：選擇合適的內參對實時熒光定量PCR(qRT-PCR)結果的準確性極其重要,在microRNA(miRNA)的qRT-PCR分析中尤為如此。通過篩選適宜分析小桐子低溫脅迫下miRNA定量表達的內參,為小桐子及其他物種miRNA的qRT-PCR分析提供有用的理論參考。基于以前的小RNA-seq結果,以低溫處理的小桐子為材料,挑選11個候選內參基因,用實時熒光定量PCR技術檢測它們在不同樣本中的表達量,采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper軟件進行表達穩定性綜合分析。結果表明,表達最穩定的基因是miR6448和U6,miR6448的Ct值為23左右,表達豐度適中;U6的Ct值為10左右,表達豐度高;因此,miR6448可作為小桐子低溫脅迫下表達豐度適中的miRNA qRT-PCR的內參基因;U6可作為小桐子低溫脅迫下豐度較高的miRNA qRT-PCR的內參基因。
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生物技術通報雜志
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