攜帶EGFP綠色熒光蛋白標記的腺病毒的構建及其在293A細胞中的包裝與表達
作者：趙芳 廣西醫科大學
摘要：目的:構建顯示EGFP綠色熒光蛋白的腺病毒質粒,在293細胞中包裝表達重組腺病毒顆粒。方法:以p Eentry-Ghrh-P2A-EGFP為模板,雙酶切出目的基因EGFP,將其與腺病毒穿梭載體Pentry-Trcp1連接為p Eentry-P2A-EGFP質粒;腺病毒骨架載體質粒PAd-DEST再與p Eentry-P2AEGFP質粒同源重組為PAd--P2A-EGFP質粒;用PEI介導轉染將PAd--P2A-EGFP質粒轉染到293A細胞,包裝成重組腺病毒顆粒。結果:PAd--P2AEGFP轉染到293A細胞中,合成熒光蛋白,熒光顯微鏡下細胞發綠色熒光。再次感染293A細胞,90%以上的細胞脫落,并且能見到綠色熒光。結論:顯示EGFP綠色熒光蛋白的腺病毒載體構建成功,并能在293A細胞中完整包裝成重組腺病毒顆粒,為研究腺病毒載體特性提供參考依據。
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生物技術世界雜志
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