穩定表達犬SLAM受體的Vero細胞系的建立與應用
摘要：信號淋巴細胞活化分子是(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)和麻疹病毒(Measles virus,MV)等麻疹病毒屬病毒的主要細胞受體,在病毒入侵細胞的過程中具有重要作用。為了構建穩定表達犬SLAM(d SLAM)受體的Vero細胞系,本研究將d SLAM基因克隆至真核表達質粒p CAGG-TK-neo中,在d SLAM基因3’端引入Flag標簽序列作為分子標記,并在其下游引入9 nt的Linker序列、豬捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV) 2A基因以及紅色熒光蛋白m Cherry基因,構建了重組質粒p CAGG-dSLAMFlag-mCherry。用該重組質粒轉染Vero細胞,經G418壓力篩選、紅色熒光蛋白表達及表達綠色熒光蛋白的重組CDV(r20/8-EGFP)感染鑒定后,篩選到穩定表達d SLAM的細胞系。CDV野生型分離株JL17感染試驗結果顯示,JL17株在第15代次的Vero-dSLAM細胞上可良好生長,而在Vero細胞上不能形成細胞病變。結果表明,Vero-dSLAM細胞可穩定表達d SLAM,為CDV野生型毒株的分離和致病機制研究奠定了基礎。
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內蒙古農業大學學報·自然科學版雜志
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