人胱抑素C大腸桿菌表達載體構建及包涵體復性研究
作者：何慶; 劉帥; 周海霞 德州學院生命科學學院功能性生物資源開發與利用省高校重點實驗室; 山東德州253023
摘要：構建大腸桿菌(E.coli)人胱抑素C基因(cysC)表達載體,并探究包涵體胞外復性方法.方法:將人胱抑素C基因克隆至原核表達載體pET32a上,電擊轉化至大腸桿菌BL21菌株中. IPTG誘導cysC表達,超聲破碎后采用SDS-PAGE電泳檢測CysC蛋白表達情況,并應用親和層析和透析復性方法對CysC蛋白進行純化和復性.結果:IPTG誘導培養重組菌BL21-cysC,可見沉淀和上清中均有pET32a-cysC蛋白表達,且沉淀中表達量更高.采用鎳柱及透析方法對表達產物進行純化,經SDS-PAGE檢測,可見分子量約34kD大小的蛋白條帶. Western Blotting檢測顯示經純化、復性后的重組CysC蛋白具有一定免疫學活性.結論:本實驗成功構建大腸桿菌cysC表達重組工程菌,經純化、復性得到的重組CysC蛋白具有一定免疫活性.
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