馬氏珠母貝α2-巨球蛋白受體結(jié)合區(qū)酵母雙雜交系統(tǒng)的構(gòu)建及自激活檢測(cè)
作者：曹丹煜; 陳剛; 張健東; 湯保貴; 周暉; 施鋼; 潘傳豪; 黃建盛; 王忠良 廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院; 廣東湛江524088
摘要：【目的】構(gòu)建馬氏珠母貝(Pinctadam artensii)酵母雙雜交文庫(kù)及α2-巨球蛋白受體結(jié)合區(qū)誘餌載體,檢測(cè)其在酵母細(xì)胞中的自激活作用?！痉椒ā坷肅LONTECHSMART技術(shù)及酵母體內(nèi)同源重組的方法構(gòu)建馬氏珠母貝酵母雙雜交cDNA文庫(kù);將α2-巨球蛋白受體結(jié)合區(qū)克隆至pGADT7載體,并轉(zhuǎn)化AH109酵母感受態(tài)細(xì)胞,檢測(cè)自激活作用。【結(jié)果與結(jié)論】酵母雙雜交文庫(kù)容量為1.11×10^7克隆/mL,重組率大于90%;菌落PCR結(jié)果顯示,插入片段長(zhǎng)度均在500bp以上;誘餌質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化至AH109菌株,且無自激活性,符合文庫(kù)構(gòu)建指標(biāo),可用于文庫(kù)篩選。
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